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APC anti-human CD45(Cat No.:CL-F304011)

APC anti-human CD45(货号CL-F304011)是一种针对人类CD45抗原的荧光标记抗体,适用于流式细胞术(FCM)检测。

抗体特性与结构

  1. 靶标与功能 CD45(白细胞共同抗原,LCA)是一种180-240 kDa的跨膜糖蛋白,属于蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族,广泛表达于除红细胞和血小板外的所有造血细胞表面。其功能包括:

    • 信号转导:参与T细胞受体(TCR)和B细胞受体(BCR)的激活信号传递,通过去磷酸化调节下游激酶活性。

    • 细胞分化与成熟:不同异构体(如CD45RA、CD45RO)在不同分化阶段的表达差异显著,例如初始T细胞高表达CD45RA,而记忆T细胞高表达CD45RO。

    • 疾病诊断:在白血病、淋巴瘤等血液系统疾病中,CD45表达水平和异构体变化是重要的免疫分型标志。

  2. 荧光标记与检测

    • APC(别藻蓝蛋白)特性:APC是一种大分子荧光蛋白,激发波长为633 nm(红色激光),发射波长为660 nm(橙红色荧光),荧光强度高且光谱分离度好,适合与FITC、PE等荧光染料联用进行多色流式分析。

  •          标记优势:APC标记的抗体信号稳定,背景低,尤其适用于低表达抗原的检测。


  • 产品简介

实验注意事项

  1. 抗体优化与验证

    • 工作浓度:建议参考说明书推荐浓度(如2.5 μL/测试),通过梯度稀释确定最佳浓度,避免非特异性结合。

    • 同型对照:需使用与抗体相同种属来源(如小鼠IgG1)、亚型和荧光标记的同型对照抗体(如APC-Mouse IgG1, κ),以排除非特异性背景。

    • 样本类型:适用于人源外周血、骨髓、脾脏等样本,需根据细胞类型调整染色条件(如离心力、孵育时间)。

  2. 流式检测流程

    • 表面染色优先:若需同时检测表面和胞内抗原,应先完成APC-CD45等表面抗体标记,再进行固定和破膜处理(如使用CL-F08824固定破膜液)。

    • 荧光补偿调节:APC与其他荧光染料联用时(如FITC、PE),需通过单标样本调节补偿值,避免光谱重叠干扰结果。建议使用自动补偿软件优化参数。

  3. 保存与稳定性

    • 储存条件:抗体需避光保存于2-8℃,避免反复冻融。未开封产品通常有效期为12个月,开封后建议1个月内使用。

    • 运输要求:需冰袋保鲜,防止温度波动导致抗体失活。

常见问题与解决方案

  • 荧光信号弱:可能因抗体浓度不足、样本处理不当(如固定时间过长)或荧光淬灭(如甲醇破膜)。建议优化抗体浓度、缩短固定时间或更换兼容的破膜试剂。

  • 非特异性背景高:可增加封闭步骤(如使用含BSA的缓冲液)或延长洗涤时间,必要时更换抗体批次。

  • 多色联用冲突:若与波长相近的荧光染料联用,需通过补偿调节或选择光谱分离度更高的荧光组合(如APC+APC-Cy7)。


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