Donkey-anti-Guinea pig IgG, AF647（Cat No.：D-GP647） 是一种驴源性、针对豚鼠IgG的荧光标记二抗，结合了高特异性抗体识别与远红光荧光（AF647）的高效成像能力，广泛应用于免疫荧光、流式细胞术及多色共定位实验。
抗体来源与靶标
宿主：驴（Donkey），多克隆抗体（pAb），针对豚鼠免疫球蛋白G（IgG）的重链和轻链（H+L）。
反应种属：特异性识别豚鼠IgG，通常经血清吸附处理以减少与其他物种（如人、小鼠、大鼠等）IgG的交叉反应。
荧光标记特性
高亮度与光稳定性：AF647在光照下不易淬灭，适合长时间成像或活细胞实验。
低自发荧光干扰：远红光发射波长可避开细胞内自发荧光，提高信噪比，尤其适用于厚组织或深部成像。
染料类型：Alexa Fluor 647（AF647），属于远红光荧光染料，激发波长约650 nm，发射波长约668 nm。
优势：
高亮度与光稳定性：AF647在光照下不易淬灭，适合长时间成像或活细胞实验。
低自发荧光干扰：远红光发射波长可避开细胞内自发荧光，提高信噪比，尤其适用于厚组织或深部成像。
抗体稀释与孵育条件
推荐稀释比：通常为1:50–1:200（具体需根据实验体系优化）。
孵育时间：室温30分钟或4°C过夜，避免过度孵育导致非特异性结合。
荧光成像参数设置
显微镜配置：使用633 nm或640 nm激光激发，搭配长通滤光片（如670 nm以上）以捕获AF647信号。
多色实验补偿：若与其他荧光染料联用，需通过单标样本进行荧光补偿校正，减少通道间干扰。
样本处理注意事项
细胞样本：4%多聚甲醛固定，0.1% Triton X-100透化。
组织样本：冰冻切片优于石蜡切片，以保留抗原活性。
固定与透化：
封闭步骤：使用5% BSA或脱脂奶粉封闭非特异性结合位点，降低背景信号。
储存与稳定性
未稀释抗体：-20°C避光保存，避免反复冻融。
稀释后抗体：4°C短期保存（1周内），长期需分装冻存。
交叉反应风险
尽管产品经血清吸附处理，仍需验证是否与其他物种IgG存在交叉反应，尤其在多物种共培养或复杂样本中。
实验对照设置
同型对照：使用未标记的驴抗豚鼠IgG或无关种属二抗，排除非特异性结合。
阻断实验：预孵育未标记的一抗以验证二抗特异性。
扫一扫 关注我们
