MitoTracker Green（Cat No.：M7514） 是一种广泛用于活细胞线粒体特异性标记的绿色荧光探针，由Invitrogen（现Thermo Fisher Scientific）生产。其核心优势在于对线粒体的高选择性、不受膜电位影响的稳定性以及适用于活细胞与固定样本的双重标记能力。
一、核心特性与优势
荧光特性与机制
激发波长：490 nm；发射波长：516 nm，呈现明亮绿色荧光，与红色荧光探针（如MitoTracker Red）兼容，便于多色标记实验。
结合原理：通过弱巯基反应性氯甲基官能团与线粒体内膜的脂质环境结合，仅在线粒体脂质环境中产生荧光，显著降低背景干扰。
适用性与稳定性
活细胞标记：可直接标记活细胞线粒体，无需固定或透化，适用于实时动态观察线粒体形态、分布及运动。
固定后保存：染色后细胞经甲醛等醛类固定剂处理，荧光仍可保留，支持后续免疫荧光或组织学分析。
活细胞线粒体动态观察
结合共聚焦显微镜或荧光显微镜，实时监测线粒体融合、分裂、迁移等动态过程，例如研究神经退行性疾病或代谢异常中的线粒体功能变化。
与细胞核标记剂（如Hoechst 33342）联用，可同步分析线粒体与细胞核的空间关系。
固定样本线粒体形态分析
适用于组织切片或细胞涂片的线粒体形态学研究，例如评估药物毒性、缺氧损伤或遗传疾病对线粒体结构的影响。
与免疫荧光技术结合，可同时检测线粒体与特定蛋白（如凋亡相关蛋白）的共定位。
细胞准备
将细胞接种于共聚焦培养皿或盖玻片，待贴壁后去除旧培养基。
染色操作
用含 100–200 nM MitoTracker Green 的预温培养基（37℃）替换旧培养基，避光孵育 15–30分钟。
孵育后弃去染色液，用 PBS 洗涤 3 次以去除未结合探针。
检测与成像
荧光显微镜/共聚焦显微镜：使用 488 nm 激发光（如氩离子激光），516 nm 发射滤片观察绿色荧光信号。
注意事项：避免长时间暴露于强光下，以减少荧光淬灭。
固定后无需透化，直接加入 MitoTracker Green 工作液孵育（同上），适用于组织切片或固定细胞的线粒体标记。
浓度与孵育时间优化
浓度过高可能导致非特异性染色，建议从 100 nM 开始梯度测试；孵育时间过长可能影响细胞活性，需根据细胞类型调整。
兼容性与干扰
避免与含巯基的试剂（如DTT）同时使用，以免影响探针结合。
若需与红色荧光探针联用，需确保光谱分离度足够，避免信号重叠。
扫一扫 关注我们
