品牌与型号：李记生物（Life-iLab）的 AC19L021，规格为 100次检测，适用于真核基因表达调控研究，通过双荧光素酶系统检测启动子活性或miRNA靶基因验证3。
检测原理：
萤火虫荧光素酶（Firefly）：催化底物 D-Luciferin 产生光信号（最强波长 560nm），用于报告基因检测。
海肾荧光素酶（Renilla）：催化底物 Coelenterazine 产生光信号（最强波长 480nm 或 465nm），作为内参校正转染效率和细胞数量差异。
| 5× Passive Luciferase Lysis Buffer | 10 mL | -20℃，12个月 |
| Firefly Luciferase Assay Buffer | 10 mL | -20℃，12个月 |
| D-Luciferin | 2 mg | -20℃，避光，6个月 |
| Renilla Luciferase Assay Buffer | 10 mL | -20℃，12个月 |
| 50× Coelenterazine | 200 μL | -20℃，避光，6个月 |
细胞裂解：
移除培养基，PBS洗涤细胞后加入1×裂解液（按5×裂解液:无菌水=1:4稀释），室温震荡15分钟，离心取上清。
检测流程：
第一步：加入 Firefly检测试剂（D-Luciferin与缓冲液混合），混匀后立即检测发光值（RLU）。
第二步：加入 Renilla检测试剂（Coelenterazine与缓冲液混合），混匀后检测，同时抑制Firefly活性。
结果计算：Firefly RLU / Renilla RLU，用于归一化分析。
灵敏度：可检测低至 10⁻²⁰ mol 的Firefly酶活性，线性范围覆盖 10⁻¹⁴至10⁻²⁰ mol。
稳定性：
裂解液可室温保存6小时，-70℃长期保存（避免反复冻融）。
工作液需现配现用，避免反复冻融影响效果3。
兼容性：支持96/384孔板高通量检测，推荐使用白色不透光孔板减少孔间干扰。
温度控制：检测时样品和试剂需预温至室温（20-22℃），避免温度波动影响反应速率。
安全防护：操作时需穿戴实验服和一次性手套，避免接触强光和高温。
内参比例：建议Renilla酶活性高于Firefly的10%，以确保抑制效果。
启动子/调控元件分析：将目标序列克隆至Firefly载体上游或下游，检测转录活性3。
miRNA靶基因验证：通过3'UTR突变实验验证miRNA与靶基因的结合3。
药物筛选：评估药物对基因表达的调控作用3。
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